医学开题报告范文参考（精选7篇）
一、选题依据、目的和意义：
骨折不愈合是骨科临床常见病症，其中以四肢长骨多发，例如胫骨，股骨，肱骨等，针对四肢长骨骨折不愈合二次手术我院多才用植骨术配合LCP重新内固定。自体髂骨作为植骨材料具有较多的优点：如取材简单、组织相容性好、无移植排斥反应、骨诱导作用强等，这些优点使得髂骨成为一种最佳的植骨供材，这在临床上已形成共识。植骨是治疗骨折不愈合的重要方法，其机制是爬行替代所引起的支架作用与供给矿物质的作用，爬行替代顺利进行的条件要求准确的复位、充分的植骨和坚强的固定。为达到充分的植骨，及早促进骨折愈合，我们采用髓内外36°植骨的方法，外用钢丝环扎，配合LCP坚强内固定，术后3~1个月内进行随访，根据愈合情况和功能恢复情况分析手术的临床疗效。选题目地在于探讨治疗四肢长骨骨折不愈合的手术改进方法和疗效，为临床治疗提供参考。
本课题以导师多年的临床资料为依据，通过对骨折不愈合手术治疗的国内外文献进行系统整理，结合山东中医药大学附属医院骨科病房对四肢长骨骨折不愈合患者的随访调查及回顾性分析，根据骨科特殊生物力学特点和导师治疗骨折不愈合的多年临床体会，分析治疗效果，并对手术中的细节问题做初步探讨与论述。同时也希望可以通过对导师的临床实践的研究、总结，能为今后的临床工作提供一些帮助和指导。
二、本课题目前国内外研究的动态、水平
治疗骨折不愈合，可分为手术治疗和非手术治疗，其中手术治疗最重要的就是植骨术加更改断端内固定。骨折不愈合应用自体骨移植治疗效果显著，已经形成共识。 植骨是治疗骨不连的重要方法，植骨方式临床多采用髓内外联合植骨。沿肌间隙进入， 骨膜下小心剥离显露骨折部位， 取出内固定器械， 清除骨断端间瘢痕， 咬除硬化骨， 打通髓腔， 修整骨折端， 手法复位， 按照骨缺损情况取骨。髓内植骨以比髓腔稍粗的骨棒，贴紧髓腔骨质;髓外上盖植骨宜用螺丝钉固定植骨块;骨碎屑充分填充残余的空隙，这样才能确实达到植骨的目的和要求。自体皮— 松质骨植骨的爬行替代缩短了骨折愈合过程，新鲜的自体骨具有生物活性，不存在免疫排异，无传染疾病的风险，同时存在骨传导和骨诱导能力。
内固定物更换得坚持以下原则，原钢板内固定者，可更换成交锁髓内针或更长的钢板置于张力侧;原交锁髓内针内固定者，可选用更大号髓内针或钢板内固定;原先短钢板内固定者，可改成较长的钢板。所有病例均需植骨。更换内固定物后，，术后石膏外固定者，应及早进行肌肉收缩锻炼活动，骨痂生长良好后，去石膏开始关节屈伸功能锻炼。但是临床上医师应该具体问题具体对待，可以根据骨痂生长情况酌情处理，出院时务必详细医嘱病人注意事项，配合医生，直到骨折完全愈合。LCP钢板内固定适用于四肢长骨骨折不愈合，可用拉力螺钉固定碎骨块及移植骨块， 并对断端行轴向加压锁定。手术关键是将骨折端的瘢痕结缔组织全部切除， 骨端硬化骨全部咬除， 露出正常骨质， 钻通髓腔， 植入的骨块必须牢固的嵌入缺损区， 间隙用松质骨填满，。应积极正确指导术后功能锻炼， 严格定期随访及指导。避免过早的不正确的负重。综上所述，对于骨折不愈合的治疗，自体骨移植疗效确切，安全稳妥，技术成熟，应用广泛，值得提倡。
三、课题研究的主要内容
1临床资料
11病例来源
本研究病例均采集于山东中医药大学附属医院骨科病房
（二）采集时间
9年5月～1年1月
（三）病例选择
1诊断标准
（1）病史：明确的外伤史，骨折后6个月没有愈合，并且没有进一步愈合倾向已有3个月。
症状：患者骨折端成角、旋转、侧移位、短缩畸形或者节段性骨缺损、持重疼痛或不能持重、局部在应力下疼痛等。
（3）体征：局部窦道形成、流脓、假关节形成或伴有局部软组织瘢痕、缺损等
（4）辅助检查：X线表现：骨端硬化，髓腔封闭;骨端萎缩疏松，中间存在较大的间隙;或骨端硬化，相互成为杵臼假关节等这三种形式中的任何一种就可以定为骨折不愈合。
纳入病例标准：
（1）符合本病诊断标准;
骨折平均愈合时间超过半年以上，有假关节形成;
（3）骨折平均愈合时间超过半年以上，多次复查X线拍片显示，骨折线
清晰可见，未见内外骨痂或内外骨痂极少;
（4）拍片显示骨折线增宽，骨折端骨面致密性硬化，骨髓腔封闭，骨质疏松，骨痂间无骨小梁形成，或伴有明显的骨缺损;
（5）临床表现有骨的感染、缺损、畸形、肢体不等长、局部窦道形成、流脓等。
3排除病例标准：
（1）不符合上述诊断标准者
患者有严重的内科疾病，不能够耐受手术者
（3）精神疾病患者
（4）资料不全影响判断者
疗效观察方法
对骨不连愈合的评价应包括骨愈合和功能恢复双重评价：
（1）骨愈合评价标准：本评价结果决定于四项指标：骨愈合、感染、畸形和肢体长度，其中骨愈合标准为X线示骨折线模糊，有连续骨痴通过骨折线，拆除或试行松动外固定物后骨折无异常活动，下肢可无痛行走，上肢持物骨折处有稳定感。 评价标准：
优：骨折愈合，无感染，断端畸形4° 完全不受限
轻微受限严重受限
5课题进度及安排：
9—5——1—1 收集病例及随访
1—1——1—1 资料汇总及数据分析
11—1——11—3 撰写论文、定稿
四、本课题特色、预期取得的结果>骨折不愈合应用自体骨移植治疗效果显著已经形成共识，治疗过程中的经验总结需要不断的进行，更要求开展回顾性工作及进行系统的整理。因此，骨折不愈合的临床资料分析就显得尤为重要。
本课题通过搜集整理山东中医药大学附属医院骨科9至1年期间的患者临床资料，对于自体骨移植治疗骨折不愈合的相关性问题进行临床研究与总结。应用统计分析评分进行术前、术后及相关方面比较，对自体骨移植治疗骨折不愈合的临床疗效获得客观、真实、准确的评价，并进一步指导临床工作。
五、可行性分析
山东中医药大学附属医院骨科是山东省中医管理局评定的重点学科、重点科室，在省内知名度较高，病人来源广泛。导师王明喜主任医师从事临床工作3余年，具有丰富的临床经验，对治疗骨折不愈合做过大量研究、临床工作，并取得了良好的效果。本课题搜集整理山东中医药大学附属医院骨科近几年的临床资料，并在导师指导下对这些一手资料进行研究与总结。
四肢长骨骨折不愈合由于并发症较多，治愈比较困难，手术后功能恢复过程漫长，因此在治疗过程中，经验的总结是非常必需的，也是可行的。本课题主要研究山东省中医院近年应用钢丝环扎36°植骨配合LCP内固定治疗四肢长骨骨折不愈合的治疗效果分析情况，因此在选题上可行性较强。课题的研究也得到了学校、附院等各部门、科室的大力支持。相信可以圆满地完成课题。
主要参考文献
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题目：中印传统医学现代发展对比研究
一、研究背景
中、印两国政府均承认并保护传统医学的发展，并且越来越重视发挥传统医学在国家卫生保健体系中的作用。印度传统医学历史、发展现状、国内外发展战略等都与中国传统医学存在极大可比性，是中国传统医学国际化发展强大的竞争对手。然而长期以来，我国对印度传统医学的情况了解并不多，尤其缺乏对中印两国传统医学现代发展的对比研宄。因此，有必要对印度传统医学管理、政策法规、医疗资源与服务、教育与科研、传统医药产业及国际化发展等现状进行研宄，为中国传统医学本土发展及国际化发展提供借鉴与参考。并阐释对我国传统医药产业国际化发展的启示。
二、研究目的与意义
1.本研究目的是通过对中印两国传统医学的国家政策、管理、医疗资源与服务、教育、科研、产业等各方面的现代本土发展及传统医药产业国际化发展现状进行对比分析，寻找当前我国传统医药本土发展及传统医药产业国际化发展过程中存在的问题与不足，阐释对我国传统医学本土发展及传统医药产业国际化发展的启示。
2.本研究一方面可为我国传统医药本土发展及国际化发展提供借鉴，另一方面可以互通有无，促进中印两国传统医学交流与发展，并促进世界传统医学的健康发展。
三、研究内容
1.对比分析中印两国传统医学现代发展现状与差异，主要包括：国家传统医学发展方针政策、传统医学管理、传统医学医疗资源与服务、传统医学科研、传统医学教育、传统医学产业及国际贸易等方面内容；
2.对比分析中印两国促进传统医学发展的因应策略、具体政策措施及取得的成效，寻找我国传统医学本土发展及传统医药产业国际化发展过程中存在的问题与不足；
3.在对比分析的基础上，针对传统医学本土发展及传统医药产业国际化发展过程中存在的问题与不足，阐释对我国传统医学本土发展及传统医药产业国际化发展的启示。
四、提纲
目录
摘要
Abstract
前言
正文
1.研究目的、意义与背景
1.1研究目的与意义
1.2研究背景
2.研究内容、方法与技术路线
2.1研究内容
2.2研究方法
2.3技术路线
3.中印传统医学政策法规与管理对比
3.1印度
3.1.1印度传统医学管理机构
3.1.2印度传统医学立法
3.1.2印度传统医学国家政策
3.2中国
3.2.1中国传统医学管理机构
3.2.2中国传统医学立法
3.2.3中国传统医学国家政策
4.中印传统医学医疗资源与服务对比
4.1传统医学医疗资源
4.1.1印度
4.1.2中国
4.2中印两国政府促进传统医学资源与服务发展的政策措施
4.2.1印度
4.2.2中国
5.中印两国传统医学高等教育对比
5.1传统医学高等教育资源
5.1.1印度传统医学高等教育院校数与招生数
5.1.2中国传统医学高等教育院校数与招生数
5.2印度阿育吠陀院校与中国高等中医药院校平均招生数
5.3中印两国传统医学高等教育院校主办机构
5.4中印两国传统医学高等教育“师生比”与“生床比”
6.中印两国促进传统医学教育发展的政策措施
6.1印度
6.2中国
7.中印两国传统医学科研对比
7.1印度研究机构
7.1.1科研管理及经费来源
7.1.2阿育吠陀研究的优先领域
7.2中国
7.2.1中医药及民族医药科研机构
7.2.2中医药科技科研经费来源
7.2.3中医药研究领域与科研成果
创新点
结语
参考文献
致谢
五、研究方法
1.文献分析法
广泛收集中印两国传统医学现代发展相关资料，通过国内、外传统医学相关期刊文献数据库、书籍、网络资源等获取中印两国传统医学相关文献以及传统医学政策、法律、法规等相关文本，通过对相关文献及文本的系统查阅、分析、整理，分析中印两国传统医学发展现状与差异。
2.统计分析法
本研究收集了中印两国关于传统医学医疗资源与服务、传统医学教育、以及传统医学产业、贸易等官方统计数据，针对不同统计指标，进行了增长幅度、年均增长率、所占比例等计算，通过量化分析测度中印两国传统医学发展水平及存在的差异。
3.比较推理法本研宄比较分析了中印两国政府对传统医学的管理模式及促进传统医学发展的政策措施及执行效果，从中分析两国的成功实践及对对方的借鉴与启示，并重点阐释对我国传统医学本土发展的启示。
4.竞争情报学方法本研宄用竞争情报学“竞争对手分析”及“分析”法，对中印两国传统医学产业的国际化发展进行分析，并阐释对我国传统医药产业国际化发展的启示。
六、研究进度安排
20xx-5-20~20xx-5-16:检查修改完成一次论文初稿
20xx-5-17~20xx-5-29:根据指导老师的讲评及意见，修改并提交二次论文草稿
20xx-5-30~20xx-5-31:讲评第二次论文草稿、集中解决有关论文漏洞问题并及时修改
20xx-6-01~20xx-6-11:基本完成论文大纲要求，论文成型，指导老师讲评修改并定稿
20xx-6-12~20xx-6-18:整理打印论文、装订论文
20xx-6-19~20xx-6-30:准备参加答辩
课题支持选定包括选题的内容、重要性、必要性
有什么临床问题需要解决?医学科研设计从文献我们已经知道什么?课题选定来源于临床问题提出，没有问题就没有科研设计。例如足月儿、早产儿、低体重、极低体重;HIE、RDs、MAS;惊厥、黄疸、呼衰;常见病、罕见病;诊断、治疗、机理等。选题需要查阅文献，要了解有无文献，有多少文献，都是哪类文献包括书本、综述、病例、动物等，这些文献结果可靠性如何?其证据等级是高等级?
方法确定
如何确定研究对象、研究指标;如何测定、收集、组织、分析资料;与研究目的密切相关，是研究前己确定的计划的一部分。如何确定研究对象?研究人群包括入组原则、排除标准(时间、地点、人群);抽样方法有随机、非随机、具体方法又是什么?分组方法也包括随机、非随机、具体方法。干预方法包括干预的有无及方法。随访方法要描述有无随访及随访的方法。
结果表达
包括数据分析主要结果(与研究目的有关的)与一般资料：募集过程及结果、研究对象的一般特征;主要结果：研究分析结果，先画出表、图的框架，表强调变量具体值，图强调变化趋势、相互关系。至少2张表，一般资料中募集过程及结果、研究对象的一般特征;主要结果中研究分析的结果。
讨论路线
解释你的结果，判断你的解释，得出你的结论，评估你的结论。
分析化学是一门实践性非常强的专业，因此实验在其中占据着重要意义。
教学的开展离不开实验教学，在实验教学中学到更多实践知识，动手能力与实际操作能力也会随之获得提升。而随着科学技术的发展，大量的新型仪器以及检验技术相继出现，医学检验专业对学生动手能力的要求也会越来越高，学生只有同时兼具高实验操作技能、较高的理论水平、独立设计医学实验的能力以及较强的分析问题能力才能成为时代所需要的医学检验人才。由此，在医学检验专业的日常教学活动中，需要重视实验教学、利用实验教学来提升整体教学质量，让医学检验专业的学生在掌握牢固理论知识的同时可以同时获得实践机会，提升实践操作能力。此外，需要注意的是，在教学过程中，教师还需要纠正学生只重视医学部分内容而忽视化学部分内容的不正确思想，全面巩固基础知识，以免由于知识的漏洞而影响到实验教学的效果。
强化医学检验专业分析化学教学效果的措施
1、在教学内容方面，抓住重点，积极进行总结和归纳。
医学检验的学生在学习分析化学之前就已经学习过相关的医用基础化学课程，教师只需要将教学内容梳理一次学生就会明确自己薄弱以及所需要掌握的地方。然后教师可以针对性地对重点内容进行讲解，节省教学时间。分析化学所涉及的内容包括数学统计以及化学等，都属于比较复杂的内容，并且会出现比较多的公式。因此，教师在教学过程中需要善于归纳，将相似内容总结在一起，让学生可以更快记住重点内容。比如在计算弱酸性体系的分布系数时，涉及到的公式比较复杂，教师可以通过其中发掘规律的方式为学生找出便于记忆的方法：公式中的分母是按照氢离子浓度降幂的顺序排列的，分子则取决于型体中所含氢的个数。抓住这样的规律之后学生就可以更快并且更深刻地记住计算公式。
2、在教学模式方面，多种教学模式相结合，丰富课堂。
在教学模式方面，教师可以在确保教学质量的基础上加强与学生之间的互动。以讲授为主，同时结合谈论、提问、小论文以及习题课等辅助手段让学生的思考成为教学中心，激发学生的创造性思维，让学生感受到学习的乐趣并逐渐取得进步。首先，教师可以从溶液的移取、天平称量的操作方法等入手进行讲授教学，在与实验课结合的基础上培养学生对检测结果精度的重视。其次，在一部分知识结束之后教师可以利用提问教学的方式来强化学生对知识点的记忆，并让学生在抢答过程中获得成就感，激发出他们对分析化学的学习热情。再次，教师可以根据学生的知识掌握情况确定一个课题，让学生围绕该课题展开谈论并相互交流。学生在交流过程中不仅可以看到自己与同学之间的差距更可以明确认识到自己的不足，然后有针对性地进行强化训练。讨论教学的开展同时也可以提高学生在教学过程中的参与度，让学生成为教学主体，在活动过程中发挥主观能动性，更加积极、主动地学习。
论临床医学检验的现状及发展趋势
几十年来，我国的临床医学取得了稳健并且快速的发展，随之一起发展的循证医学也在临床医学中起到了广泛的应用。而临床检验学科已经从医学检验向检验医学发展，检验科不再是以往的辅助科室，其渐渐的在与临床相关联，已经成为一门独立的学科。医学检验是一门运用科学的现代物理化学知识和手段来进行医学诊断的学科，其主要研究如何运用科学的实验技术和先进的设备为临床诊断和治疗提供依据。医学检验涉及了基础医学、生物化学、临床医学、管理学等诸多的科目，运用这些学科可以快速的准确的为疾病提供诊断的确实依据，是现代医疗工作中所不可缺少的一个环节。
我国检验医学的发展现状
近年来，我国的临床医学检验教育得到了飞速的发展，20世纪50年代初期，我国便在中专卫生学校开设了医学检验的专业，借此培养初级、中级医学检验相关人才。1983年有相继在高等医学院校设置了本科医学检验的专业，并为我国培养出大批的医学检验相关高等人才。直至今日，我国的医学检验相关人才的培养体系已经初步完成，形成了一套专业的人才培养渠道。现已经形成了目标明确，具有普通检验本专科、硕士和博士研究生(医学科学学位)、本硕连读七年制(医学专业学位)、成人检验本专科、高职检验本专科等层次齐全、形式多样的教育体系。这种完善的人才培养体系，为我国临床检验医疗事业培养出了大批的优秀人才，并使得临床检验人员的基本素质得到了普片的提高。
我国的质量控制管理体系起步较晚，但部分学科以及形成了较为合理的质控体系。目前，分析前质控、分析中质控和分析后质控都取得了一定程度的良好发展，其已经可以基本的保证结果的准确性和可比性。同时随着改革开放深化和经济增长，我国也在大力的运用国际信息技术交流，学习和引进医疗发达国家的先进专业技术和检验设备。
我国临床医学检验中存在的主要问题
资源管理的不合理：目前，许多医院的资源管理工作做得不好，其具体体现在：人员编配不合理(存在部分岗位人员配置过多或过少的情况)和医疗设备的编配不合理。人员编配不合理导致了检验队伍的松散，相互之间不能形成有力的合作，检验过程存在着误操作和不合理，导致了检验结果的误差。而且这种人力资源编配不合理现象还会带来一些问题，例如同一医院内重复配置人员设备会造成资源的浪费;由于人员配置的分散，还会使得整个体系得不到统一的管理，使得医院相关人员的业务素质得不到提高。
检验医学理论体系不全：虽说近年来我国的临床医学方面取得了很大的发展，但是我国的医学检验领域在发展上主要集中于硬件的建设上，更加倾向于设备的更新换代，反而忽视了对于检验医学理论的重视程度。目前，我国的医学检验只能算是实验医学检验学其还未形成一套完善的、新的`理论体系。针对医学检验问题上的科研能力较低，相关人员的创新(科研)意识淡薄，这种现象已经阻碍了检验医学的良好发展趋势。
质量控制不到位：没有良好的质量控制不仅会影响检验结果的准确性，而且其还可能误导临床诊断和治疗，给患者的健康产生影响，严重的甚至会危及到患者的生命。质量控制工作在任何情况下都必须重视，但部分检验人员因为现代化设备的发展和应用，开始逐渐的淡薄对将质控工作的重视。
临床医学检验未来的发展趋势
提高人才素质：我国的检验医学正向着信息化、自动化发展。所以我们应该根据社会和检验医学发展的需要，来培养适应新时代的高素质检验人才。首先，临床医学检验的检验人员必须具备扎实的专业基础，其中包括临床医学基础知识，物理化学等相关的知识。其次，临床检验人员必须具备专业的设备操作技能，设备操作的规范可以影响到检验结果的准确。最后在教育上还应当进行引导，努力扩宽临床检验人员的相关知识。不能仅仅局限于本专业的知识，还应当对其它相关的知识进行了解。
一、开题报告的写法
开题报告的基本内容及其顺序：
论文的目的与意义；国内外研究概况；论文拟研究解决的主要问题；论文拟撰写的主要内容（提纲）；论文计划进度；其它。其中的核心内容是“论文拟研究解决的主要问题”。在撰写时可以先写这一部分，以此为基础撰写其他部分。具体要求如下：
1.论文拟研究解决的问题
明确提出论文所要解决的具体学术问题，也就是论文拟定的创新点。
明确指出国内外文献就这一问题已经提出的观点、结论、解决方法、阶段性成果。 评述上述文献研究成果的不足。 医`学教育网搜集整理提出你的论文准备论证的观点或解决方法，简述初步理由。
你的观点或方法正是需要通过论文研究撰写所要论证的核心内容，提出和论证它是论文的目的和任务，因而并不是定论，研究中可能推翻，也可能得不出结果。开题报告的目的就是要请专家帮助判断你所提出的问题是否值得研究，你准备论证的观点方法是否能够研究出来。
一般提出3或4个问题，可以是一个大问题下的几个子问题，也可以是几个并行的相关问题。
2.国内外研究现状
只简单评述与论文拟研究解决的问题密切相关的前沿文献，其他相关文献评述则在文献综述中评述。基于“论文拟研究解决的问题”提出，允许有部分内容重复。
3.论文研究的目的与意义
简介论文所研究问题的基本概念和背景。
简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题。
简单阐述如果解决上述问题在学术上的推进或作用。
基于“论文拟研究解决的问题”提出，允许有所重复。
4.论文研究主要内容
初步提出整个论文的写作大纲或内容结构。由此更能理解“论文拟研究解决的问题”不同于论文主要内容，而是论文的目的与核心。
二、开题报告的格式
由于开题报告是用文字体现的论文总构想，因而篇幅不必过大，但要把计划研究的课题、如何研究、理论适用等主要问题说清楚，应包含两个部分：总述、提纲。
1.总述
开题报告的总述部分应首先提出选题，并简明扼要地说明该选题的目的、目前相关课题研究情况、理论适用、研究方法、必要的数据等等。
2.提纲
开题报告包含的论文提纲可以是粗线条的，是一个研究构想的基本框架。可采用整句式或整段式提纲形式。在开题阶段，提纲的目的是让人清楚论文的基本框架，没有必要像论文目录那样详细。
3.参考文献
开题报告中应包括相关参考文献的目录
4.要求
开题报告应有封面页，总页数应不少于4页。版面格式应符合以下规定。
开题报告
学生：
一、选题意义
1、理论意义
2、现实意义
二、论文综述
理论的渊源及演进过程
一、立题依据（科学意义及国内外现状分析及参考文献）
恶性黑色素瘤是一种高度恶性且侵袭性的癌之一，多发生于皮肤，早期发生血行转移。对放、化疗不敏感，在世界范围内发病率增高，人们一直在期待着可以征服恶性黑素瘤的新的疗法的出现！
最近大量的数据表明恶性肿瘤的发展与T—钙粘蛋白的表达变化相关、T—钙粘蛋白已在乳腺癌、前列腺癌、肝癌、肺癌[1—3] 、胃癌、胰腺癌、卵巢癌[4—9]等多种恶性肿瘤中被检测到表达减少、最近的研究表明T/H—钙粘蛋白在乳腺癌中的重新表达能抑制肿瘤细胞的生长，降低体外培养的肿瘤细胞的侵袭潜能[1]、T/H—钙粘蛋白这个新型钙粘蛋白分子在人类许多癌细胞中表达都降低表明它或许在肿瘤细胞的侵袭和转移[10]及维持正常细胞的表型中起重要作用[11]、T/H—钙粘蛋白与肿瘤的发生、发展有着密切的联系，也许它会为肿瘤的诊断和治疗带来新的契机、T—钙粘蛋白是否对恶性黑色素瘤也有作用，目前还没有相关研究的报道，所以本实验将进行相关方面的探讨性研究！
二、研究内容及预期成果（说明具体研究内容、创新点及拟解决的关键问题、预期成果及提供形式）
研究内容：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T—cadherin表达情况
第二部分T—cadherin基因克隆和真核表达载体的构建
第三部分：T—cadherin基因的真核表达及生物活性分析
创新点：首次将T—cadherin基因转染黑素瘤细胞
拟解决的关键问题：通过RT—PCR反应扩增出T—cadherin的基因全长。
预期成果及提供形式：
观察T—钙粘蛋白在正常皮肤组织细胞、痣细胞及黑色素瘤细胞中的表达情况！
进一步阐明T—钙粘蛋白作用机制
T—钙粘蛋白基因转染入黑色素瘤细胞后观察对其增殖和转移活性的抑制情况，探索临床诊断和治疗黑色素瘤及其它肿瘤的方法！
三、研究方案（包括研究方法、技术路线、研究进度安排）
研究方法：
第一部分：正常表皮组织、痣细胞及黑色素瘤细胞中T—cadherin表达情况
免疫组织化学和免疫细胞化学
1、材料：从正常人皮肤切取的痣组织，人黑色素瘤细胞株
2、主要试剂和溶液
（1）第一抗体：兔抗人T—cadherin抗体
（2）第二抗体：生物素标记羊抗兔IgG
（3）“三抗”：链亲和霉素标记HRP
3、设备
4、方法
（1）冷冻切片的免疫染色程序
（2）活细胞的免疫染色程序
5、荧光显微镜检
注意：为保证结果的可靠性应该同时设有对照
阳性对照（正常组织）；
阴性对照（PBS代替一抗）以证明抗体的特异性。
第二部分T—cadherin基因克隆和真核表达载体的构建
1、材料：
（1）组织和细胞
（2）菌株与质粒
（3）工具酶
（4）试剂
（5）仪器
2、方法
（1）引物的设计
（2）总RNA的提取：异硫氰酸胍—酚—氯仿抽提一步法
（3）甲醛变性琼脂糖凝胶电泳分析其质量，观察所提RNA有无明显降解；
（4）逆转录RT反应：为了证实RT反应的成功设管家基因GAPDH为内对照
（5）PCR扩增：利用上下游引物，在DNA聚合酶下对目的片段进行扩增，PCR过程设β—actin为内对照
（6）PCR产物的回收、纯化
（7）PCR产物的克隆
（8）DNA序列测定
（9）真核重组表达质粒的构建
（10）阳性重组质粒的鉴定和筛选
（11）质粒的大量提取
（12）转染黑色素瘤细胞
第三部分：T—钙粘蛋白基因的真核表达及生物活性分析
1、材料
2、方法
（1）转染细胞的培养
（2）Western印迹法检测转染后蛋白的表达
（3）流式细胞周期分析
（4）凋亡的检测
技术路线图：
研究进度安排：
20xx、9——20xx、7学习学位课程，查阅文献，完成课题设计
20xx、9——20xx、9基本完成实验研究工作
20xx、10——20xx、3完成实验补遗工作并进行统计分析，撰写论文
20xx、4——20xx、6论文答辩
四、经费预算
试剂费用：15000元
组织及细胞：1000元
文献资料费：500元
论文打印费：1000元
答辩费：1500元
总计：19000元
五、课题可行性分析
实验在导师的指导下进行，导师段昕所教授、主任医师对黑色素瘤的诊断治疗、检测方法和研究进展有深入的了解，对本课题的研究设计及实验有重要的指导意义。
已完成黑色素瘤及T—钙粘蛋白研究最新进展的文献检索和综述报告工作。
所有实验均在承德医学院附属医院皮肤病研究室和中心实验室完成。实验室的老师实验技术熟练，在细胞培养、免疫组化及分子生物学等方面都可给予指导；实验所需的科研仪器设备实验室均具备。
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